Metodologie di indagine in biologia cellulare animale e istolgia

Colture cellulari e loro applicazioni. Caratteristiche essenziali di un laboratorio di colture cellulari. Sterilità e controllo di contaminazioni. Allestimento, mantenimento e conservazione di colture in sospensione e aderenti al substrato: fasi iniziali delle colture cellulari, tripsinizzazione dei monostrati, evoluzione delle linee cellulari, isolamento di cloni, criopreservazione. Tipi di colture: colture primarie (colture d'organo e tissutali), secondarie, linee cellulari finite, continue, colture massive o clonali, ibridomi.

Tecniche di caratterizzazione e monitoraggio di cellule in coltura. Valutazione della vitalità e della proliferazione cellulare (live cell labeling, saggi colorimetrici e citofluorimetrici). Valutazione della apoptosi mediante microscopia a fluorescenza e citofluorimetria. Valutazione della senescenza cellulare.

Tecniche di rilevazione a livello subcellulare di proteine reporter fluorescenti. Introduzione di DNA esogeno nelle cellule di mammifero: metodi di trasfezione, trasfezioni transienti, isolamento di linee stabilmente transfettate. Sonde fluorescenti. GFP e mutanti della GFP: sviluppo e proprietà spettroscopiche. Applicazioni della GFP: localizzazione subcellulare di proteine mediante microscopia confocale, analisi delle interazioni proteina-proteina (FRET), analisi della dinamica delle proteine (FRAP), GFP fotoattivabili.

Cellule staminali: origine delle cellule staminali, caratteristiche delle cellule staminali embrionali e adulte. Cellule staminali pluripotenti indotte. Mantenimento in coltura di cellule staminali e le loro applicazioni in campo terapeutico.

Tecniche istologiche per lo studio fenotipico e funzionale di tessuti biologici: prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico. Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche.